| Functional Evaluation of the Signal Peptides of Secreted Proteins
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Author:
Date:
2018-05-05
[Abstract] Here, we describe a method that can be used to evaluate the function of predicted signal peptides. This method utilizes the yeast Saccharomyces cerevisiae YTK12 strain and pSUC2 vector in which the pSUC2 vector with fused predicted signal peptide is transformed into yeast. The function of the signal peptides can be evaluated by using different selective media and color reaction. In this protocol, we provide the detailed description of manipulation in order to implement easily.
[摘要] 在这里，我们描述了一种可用于评估预测信号肽功能的方法。 该方法利用酵母酿酒酵母YTK12菌株和pSUC2载体，其中将具有融合的预测信号肽的pSUC2载体转化到酵母中。 信号肽的功能可以通过使用不同的选择性培养基和显色反应来评估。 在这个协议中，我们提供了操作的详细描述以便轻松实现。
【背景】微生物真核生物，如真菌和卵菌，可以分泌丰富的蛋白质来发挥各种功能。目前，从氨基酸序列预测信号肽的最广泛使用的方法是使用软件SignalP（Petersen等人，2011）。酵母YTK12菌株为转化酶阴性，pSUC2载体含有转化酶基因但缺少甲硫氨酸（Met）和信号肽序列，因此YTK12菌株和pSUC2载体广泛用于肽分泌的生物学评价（Jacobs等人 >，1997; Oh等人，2009）。此外，颜色反应可用于验证结果，因为转化酶的酶活性可以通过将2,3,5-三苯基氯化四唑（TTC）还原成不溶性红色1,3,5-三苯甲forma胺（TPF ）。尽管该方法一般用于评估信号肽的功能，但没有关于该方法的具体和详细的信息（Oh等人，2009; Song等人 >，2015）。在这里，我们描述了一种改进的高效酵母转化方法（Gietz和Schiestl，2007）和详细的方案来评估信号肽的功能，这将是分泌蛋白质研究的主要部分。
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| Cytohistochemical Determination of Calcium Deposition in Plant Cells
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Author:
Date:
2016-01-20
[Abstract] Calcium plays important roles in maintaining plant cellular structure and also acts as a key secondary messenger in intercellular signaling. Thirty years ago, methods of detecting calcium in sub-cellular level had been established (Stockwell and Hanchey, 1982; Borgers et al., 1982) and reviewed extensively (Wick and Heplerm, 1982). We had used the method of testing calcium localization in salt tolerance improved transgenic alfalfa plant (Zhang and Wang, 2015). Here, we describe the protocol of testing calcium deposition by staining with potassium pyroantimonate (PPA) in detail, which was adapted from former reports (Stockwell and Hanchey, 1982; Borgers et al., 1982). The principle of this protocol is that the Ca2+ can react with antimonite and from black ...
[摘要] 钙在维持植物细胞结构中起重要作用，并且还在细胞间信号传导中作为关键的第二信使。三十年前，已经建立了在亚细胞水平检测钙的方法（Stockwell和Hanchey，1982; Borgers等人，1982）并广泛地综述（Wick和Heplerm，1982）。我们使用测试钙定位的方法在耐盐改良的转基因苜蓿植物中（Zhang和Wang，2015）。在这里，我们描述了通过用详细的焦锑酸钾（PPA）染色测试钙沉积的方案，其改编自以前的报道（Stockwell和Hanchey，1982; Borgers等人，1982）。该方案的原理是Ca 2+ 2+可以与锑矿和黑色颗粒反应，这可以在透射电子显微镜下观察到。该协议包括植物组织的常见显微操作技术，用透射电子显微镜和照相观察。
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