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Date:
2017-08-05
[Abstract] The establishment of the CRISPR/Cas9 technology in diatoms (Hopes et al., 2016; Nymark et al., 2016) enables a simple, inexpensive and effective way of introducing targeted alterations in the genomic DNA of this highly important group of eukaryotic phytoplankton. Diatoms are of interest as model microorganisms in a variety of areas ranging from oceanography to materials science, in nano- and environmental biotechnology, and are presently being investigated as a source of renewable carbon-neutral fuel and chemicals. Here we present a detailed protocol of how to perform CRISPR/Cas9 gene editing of the marine diatom Phaeodactylum tricornutum, including: 1) insertion of guide RNA target site in the diatom optimized CRISPR/Cas9 vector (pKS diaCas9-sgRNA), 2) ...
[摘要] 在硅藻(Hopes ,2016; Nymark等人,2016)中建立了CRISPR / Cas9技术,使得能够简单,廉价和有效地引入目标 这个非常重要的真核浮游植物群的基因组DNA的改变。 硅藻在纳米和环境生物技术领域从海洋学到材料科学,各种领域的示范性微生物都是有意义的,目前正在作为可再生碳中和燃料和化学品的来源进行调查。 在这里,我们提出了如何进行海洋硅藻三角褐指藻CRISPR / Cas9基因编辑的详细方案,包括:1)在硅藻优化的CRISPR / Cas9载体(pKS diaCas9)中插入引导RNA靶位点 -sgRNA),2)用于将pKS diaCas9-sgRNA质粒导入P的生物弹道转化。 三分支毛细胞和3)基于高分辨率熔融的PCR测定以筛选CRISPR / Cas9诱导的突变。 【背景】CRISPR / Cas9系统已被证明是许多真核生物中非常有效和成功的基因组编辑系统,现在也包括微藻(Hopes等人,2016; Nymark等人)。 ,2016; Shin 等人,2016)。 CRISPR / Cas9系统包括引导RNA(gRNA)和称为Cas9的核酸酶(Sander and Joung,2014)。 这两个分子形成复合物,其中gRNA将复合物引导至感兴趣的靶标。 ...
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