| In vitro Differentiation of Human iPSC-derived Cardiovascular Progenitor Cells (iPSC-CVPCs)
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Author:
Date:
2020-09-20
[Abstract] Induced pluripotent stem cell derived cardiovascular progenitor cells (iPSC-CVPCs) provide an unprecedented platform for examining the molecular underpinnings of cardiac development and disease etiology, but also have great potential to play pivotal roles in the future of regenerative medicine and pharmacogenomic studies. Biobanks like iPSCORE ( Stacey et al., 2013; Panopoulos et al., 2017), which contain iPSCs generated from hundreds of genetically and ethnically diverse individuals, are an invaluable resource for conducting these studies. Here, we present an optimized, cost-effective and highly standardized protocol for large-scale derivation of human iPSC-CVPCs using small molecules and purification using metabolic selection. We have successfully applied this protocol ...
[摘要] [摘要 ] 诱导性多能干细胞衍生的心血管祖细胞（iPSC-CVPCs）为检查心脏发育和疾病病因的分子基础提供了前所未有的平台，但在再生医学和药物基因组学的未来中也具有重要作用。像iPSCORE这样的生物库（Stacey 等，2013 ；Panopoulos 等，2017）， 其中包含由数百个遗传和种族不同的个体产生的iPSC，是进行这些研究的宝贵资源。在这里，我们为小分子大规模衍生人iPSC-CVPCs和代谢选择纯化提供了一种优化，具有成本效益和高度标准化的方案。我们已经成功地应用了该协议，从154种不同的iPSCORE iPSC品系中获得了iPSC-CVPC，从而获得了大量的高纯度心脏细胞。一个重要的我们的协议的组成部分是Ç ELL Ç onfluency 估计S（ccEstimate ），用于估计当iPSC集单层将达到80％汇合，这是用于发起的iPSC-CVPC推导最佳的时间的自动方法，并且使得协议为易于在具有不同增长率的iPSC系列中使用。此外，我们发现跨iPSC-CVPC的细胞异质性是由于两种截然不同的心脏细胞类型（心肌细胞（CMs）和心外膜衍生细胞（EPDCs））的比例不同导致的，这两种细胞在心脏再生中均具有关键作用。该协议消除了iPSC线到线优化的需要，并且可以轻松地进行调整和扩展，以进行高通量研究或生成大量适用于再生医学应用的细胞。
[背景 ] ...
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| Integration of Human Induced Pluripotent Stem Cell (hiPSC)-Derived Neurons into Rat Brain
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Author:
Date:
2020-09-05
[Abstract] Human neuron transplantation offers novel opportunities for modeling human neurologic diseases and potentially replacement therapies. However, the complex structure of the human cerebral cortex, which is organized in six layers with tightly interconnected excitatory and inhibitory neuronal networks, presents significant challenges for in vivo transplantation techniques to obtain a balanced, functional and homeostatically stable neuronal network. Here, we present a protocol to introduce human induced pluripotent stem cell (hiPSC)-derived neural progenitors to rat brains. Using this approach, hiPSC-derived neurons structurally integrate into the rat forebrain, exhibit electrophysiological characteristics, including firing, excitatory and inhibitory synaptic activity, and establish ...
[摘要] [摘要] 人类神经元移植为建模人类神经系统疾病和潜在的替代疗法提供了新的机会。然而，人脑皮层的复杂结构分为六层，具有紧密互连的兴奋性和抑制性神经元网络，这对体内移植技术获得平衡，功能稳定和稳态稳定的神经元网络提出了重大挑战。在这里，我们提出了一项协议，将人类诱导的多能干细胞（hiPSC ）衍生的神经祖细胞引入大鼠脑。使用这种方法，hiPSC 衍生的神经元在结构上整合到大鼠前脑中，表现出电生理特性，包括放电，兴奋性和抑制性突触活性，并与宿主电路建立神经元连通性。
[背景] 人类大脑皮层是一个复杂的细胞镶嵌体，在不同的皮质层（I-VI）中包含多样化的神经元亚型，可建立轴突输出和树突状输入的特定模式，提供了皮质电路的基本底物（Rakic，2009; Lodato 等等人，2011； Lui 等人，2011）。特别地，兴奋性和抑制性神经传递的平衡对于适当的脑功能是必需的（Turrigiano和Nelson，2004）。人类诱导的多能干细胞（hiPSC ）可以在人类遗传背景下对人类神经系统疾病进行建模（Dolmetsch和Geschwind，2011； Brennand 等，2015； Vera和Studer，2015）。建立体外系统以将hiPSCs ...
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| Activation of Fibroblast Contractility via Cell-Cell Interactions and Soluble Signals
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Author:
Date:
2018-09-20
[Abstract] The collagen contraction assay is an in vitro, three-dimensional method to determine the factor(s) affecting the contractile behavior of activated cells such as fibroblasts in either physiological or pathological scenarios. The collagen lattices/hydrogels are seeded with fibroblasts to mimic the interactions between these cells and their surrounding extracellular matrix proteins in the connective tissue. This method is an important platform to assess components as potential therapeutic targets to prevent pathologies such as fibrosis, which are manifestations of hyperactivated fibroblasts. We have described a basic version of this collagen contraction assay, which is amenable to customization using different cell types under diverse experimental conditions.
[摘要] 胶原收缩测定是体外三维方法，用于确定影响生理或病理场景中活化细胞如成纤维细胞的收缩行为的因子。 胶原蛋白晶格/水凝胶用成纤维细胞接种，以模拟这些细胞与其周围细胞外基质蛋白在结缔组织中的相互作用。 该方法是评估组分作为潜在治疗靶标的重要平台，以预防纤维化等病症，这些病症是过度活化的成纤维细胞的表现。 我们已经描述了这种胶原收缩测定的基本版本，其适于在不同实验条件下使用不同细胞类型进行定制。
【背景】细胞外基质的组织收缩和重塑是许多生理条件（例如伤口愈合）中的基本过程。这两种现象的核心是成纤维细胞，它不仅产生和分泌细胞外基质蛋白，而且还可以通过机械相互作用重组它们。有趣的是，这些细胞行为通常在诸如纤维化的病理条件下被夸大（Desmoulière et al。，2005），从而说明需要理解这些过程的分子调节。虽然人们早就知道，胶原蛋白是细胞外基质的主要成分之一，是组织收缩的主要参与者（Bell et al。，1979），对机械细节的透彻理解。这个过程仍然难以捉摸。对体外成纤维细胞胶原基质体外收缩的研究使研究人员能够识别导致组织收缩的新型运动员（Ngo et al。，2006; Su and Chen， 2015年）。基于该测定，可溶性因子如TGFβ（Levi-Schaffer 等，1999）和免疫细胞（Garbuzenko et al。，2002; ...
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